Daicel 手性柱柱效下降？100% 乙醇冲洗的正确操作（适用于 AD-H、OD-H 等）

在 Daicel 手性柱（如 CHIRALPAK® AD-H、CHIRALCEL® OD-H 等多糖涂敷型手性柱）的使用中，柱效下降（表现为理论板数降低、分离度变差、峰形展宽）是常见问题，多因固定相残留杂质、异丙醇吸附或轻微固定相聚集导致。

而 100% 乙醇冲洗 是恢复柱效的高效手段 —— 其极性适中，既能溶解残留污染物，又不破坏硅胶表面的多糖涂敷层，尤其适配 AD-H、OD-H 等正相常用手性柱，以下为正确操作流程。

一、为什么 100% 乙醇能恢复柱效？

AD-H、OD-H 手性柱的固定相为硅胶表面涂敷直链淀粉 / 纤维素衍生物，柱效下降多源于：

① 高比例异丙醇流动相残留（如 AD-H 用 80%~100% 异丙醇后）；

② 生物碱、芳香族化合物等强吸附样品残留；

③ 固定相因溶剂交替产生的轻微聚集。

100% 乙醇可通过以下作用恢复柱效：

· 溶解残留的异丙醇、样品杂质，避免其堵塞手性空腔；

· 缓解多糖固定相的轻微聚集，恢复螺旋结构的选择性；

· 中性特性不会破坏涂敷层，兼容 AD-H、OD-H 的固定相材质。

二、正确操作步骤（以 4.6mm 内径分析柱为例）

1. 预处理：先去除 “高危杂质"

冲洗前需先清除柱内盐、强碱性添加剂（如二乙胺），避免与乙醇反应或析出：

· 若之前用 正相体系（如烷烃 / 异丙醇）：用 正己烷 / 异丙醇（90:10 v/v） 以 0.5ml/min 冲洗 20 分钟，去除残留异丙醇与碱性添加剂；

· 若之前用 反相体系（如乙腈 / 水）：先用 水 / 乙腈（60:40 v/v） 以 0.5ml/min 冲洗 30 分钟，去除缓冲盐，防止盐与乙醇混合析出堵塞柱床。

2. 100% 乙醇冲洗：控制流速与时间

· 流速：4.6mm 内径的 AD-H、OD-H 手性柱，推荐流速 0.5ml/min（半制备柱按内径换算，如 20mm 内径用 19ml/min），避免高流速导致柱压骤升（不超过 30MPa）；

· 时间：室温下冲洗 60 分钟，确保乙醇充分浸润柱床 —— 对残留严重的柱（如 OD-H 分离生物碱后），可延长至 90 分钟，但不建议超过 2 小时，避免固定相过度溶胀。

3. 后续平衡：恢复分析条件

冲洗结束后，需用目标分析的流动相平衡柱床，避免溶剂突变影响分离：

· 正相分析（如 AD-H 拆分芳香族化合物）：用 正己烷 / 异丙醇（90:10） 以 0.5ml/min 平衡 30 分钟，再恢复正常流速（1.0ml/min）；

· 复测柱效：进样标准品（如 AD-H 用联萘酚，OD-H 用C10H15NO），通常理论板数可恢复至初始值的 85% 以上，分离度明显改善。

三、适用场景与注意事项

1. 适配柱型：仅用于多糖涂敷型

100% 乙醇冲洗仅适用于 AD-H、OD-H、AS-H、OJ-H 等多糖涂敷型手性柱，禁止用于 AGP（蛋白质键合型，乙醇会导致蛋白质变性）、CR (+)（冠醚型，乙醇破坏涂敷层）。

2. 禁忌：避免频繁操作

每月最多冲洗 1~2 次，过度冲洗会加速多糖固定相老化；若冲洗后柱效仍无改善，需排查是否为固定相永远损坏（如强碱性溶剂腐蚀硅胶），而非单纯残留问题。

通过以上操作，可低成本解决 AD-H、OD-H 等 Daicel 手性柱的常见柱效下降问题，既能避免因柱效低导致的分析误差，又能延长手性柱使用寿命，适配药物研发、天然产物分析等场景的长期使用需求。

广州绿百草作为 Daicel 大赛璐授权代理商，提供色谱柱选型、方法开发等技术支持，助力客户高效实现手性分离与分析。