反相手性柱方法开发：Daicel CHIRALCEL OD-RH 的 pH 与温度调节技巧

Daicel CHIRALCEL® OD-RH 作为多糖衍生物涂敷型反相手性柱，凭借硅胶表面涂敷的纤维素 - 三 (3,5 - 二jiajiben基氨基甲酸酯) 固定相，在水溶性手性化合物（如生物碱、药物中间体）分离中表现突出。

反相模式下，pH 与温度是影响其手性选择性、峰形及柱效的核心因素，合理调节可大幅提升分离效果，同时需结合同类键合型反相手性柱（如 Daicel CHIRALPAK IG 手性柱（87325））的特性差异优化方案。

一、pH 调节：适配化合物极性，优化峰形与选择性

Daicel CHIRALCEL OD-RH 手性柱的 pH 适用范围为 2.0~9.0，不同 pH 条件通过改变固定相电荷状态与样品解离度，影响手性空腔与对映体的相互作用：

· 酸性 / 两性化合物（如含羧基的手性药物）：

推荐 pH 2.0~3.0，选用 50mM 磷酸盐缓冲液（磷酸调节）或 0.1% 甲酸水溶液，抑制样品解离，增强与固定相的氢键作用。例如拆分布洛芬对映体时，pH 2.5 条件下分离度（Rs）可达 2.8，峰形对称因子接近 1.0。

· 碱性化合物（如mahuangjian、伪mahuangjian）：

适配 pH 8.0~9.0，用 20mM 碳酸氢铵缓冲液（二乙胺调节 pH），减少固定相残留硅羟基对碱性样品的吸附，避免峰形拖尾。

需注意：pH>7.0 时柱温必须控制在 5~25℃，防止高温加速硅胶基质溶解，这一点与键合型的 CHIRALPAK IG 手性柱（87325）类似 ——CHIRALPAK IG 手性柱（87325）虽为键合型，pH>7 时也需低温保护，但耐碱性略优于涂敷型的 Daicel CHIRALCEL OD-RH。

· 中性化合物（如酯类、酰胺类）：

无需严格调节 pH，直接用纯水 / 乙腈（60:40 v/v）即可，依赖固定相的空间位阻效应实现拆分。

禁忌：禁止使用 pH>9.0 的强碱性流动相（如高浓度氢氧化钠溶液），会破坏 CHIRALCEL OD-RH 的涂敷型固定相；也避免 pH<2.0 的强酸性条件，长期使用会导致固定相脱落。

二、温度调节：平衡分离度与分析效率

CHIRALCEL OD-RH 手性柱的柱温范围为 0~40℃，温度通过影响分子运动速率与手性识别作用，调节保留时间与分离度，需结合样品特性选择：

· 难拆分对映体（如结构高度相似的手性胺）：

降低柱温至 0~10℃，减缓分子传质速率，增强固定相螺旋空腔与对映体的空间匹配差异。例如拆分mahuangjian对映体时，0℃ 比 25℃ 分离度提升 35%，但保留时间延长约 1.5 倍。

· 高保留样品（如疏水性较强的手性酯）：

升温至 30~40℃，加快样品洗脱，缩短分析时间（如从 25min 压缩至 12min），同时避免峰形展宽。此条件下，CHIRALCEL OD-RH 需搭配保护柱，防止高温加速固定相老化 —— 这与 CHIRALPAK IG 手性柱（87325）不同，CHIRALPAK IG 手性柱（87325）为键合型，高温下固定相更稳定，可在 40℃ 长期使用。

· 常规分析：

25℃ 为最佳平衡温度，兼顾分离度（Rs≥2.0）与分析效率（单样分析时间 <20min），适配药物研发中批量样品的手性纯度检测。

三、与 IG 手性柱（87325）的调节逻辑差异

虽同属反相手性柱，Daicel CHIRALCEL OD-RH（涂敷型）与 Daicel CHIRALPAK IG 手性柱（87325，键合型）的调节需注意核心差异：

· pH 耐受：CHIRALPAK IG 手性柱（87325）可在 pH 2.0~9.0 全范围常温使用，CHIRALCEL OD-RH 仅在 pH 2.0~7.0 可常温操作；

· 温度上限：CHIRALPAK IG 手性柱（87325）40℃ 下性能稳定，CHIRALCEL OD-RH 长期高温（>30℃）易导致涂敷层脱落。

实际开发中，可先以 CHIRALCEL OD-RH（25℃、pH 5.0）初筛，若分离度不足，尝试低温 + pH 微调；若需长期高温或高 pH 分析，换用 CHIRALPAK  IG 手性柱（87325）优化。

通过精准调控 pH 适配化合物极性、温度平衡分离效率，可充分发挥 CHIRALCEL OD-RH 手性柱的反相分离优势，结合与 CHIRALPAK IG 手性柱（87325）的特性差异，为水溶性手性化合物（如药物 API、天然产物）的分离提供高效解决方案。