液相色谱柱是液相色谱(HPLC)中关键的组成部分,主要由柱管、压帽/卡套、筛板(滤片)等组成。其孔径和比表面积对分离效果有重要影响:孔径小、比表面积大有利于增强保留和分离度,但可能增加背压;孔径大、比表面积小则适用于梯度分析。
液相色谱柱的工作原理主要基于样品在流动相和固定相之间的分配。当样品通过色谱柱时,不同物质分子与固定相的亲和力不同,导致它们在柱中的停留时间不同,从而实现分离。这种分离过程是在载气的推动下,样品组分在流动相(气体或液体)和固定相之间反复分配完成的。
1、检查色谱柱信息
确认色谱柱型号、规格(如柱长、内径、填料类型)、适用流动相范围(如pH、有机溶剂比例)及最大操作压力。
检查色谱柱两端是否有保护套,避免填料暴露或污染。
2、选择适配接头与管路
使用与色谱柱接口匹配的接头(如PEEK、不锈钢),避免漏液或死体积。
确保管路内径与色谱柱接口一致(通常为1/16英寸),减少柱外展宽效应。
3、流动相预处理
脱气:使用超声波脱气或在线脱气装置去除溶解气体,防止气泡干扰基线或损坏柱子。
过滤:通过0.22μm或0.45μm滤膜过滤流动相,避免颗粒堵塞柱子。
平衡pH:若使用缓冲盐,需调节pH至填料耐受范围(如C18柱通常pH 2-8)。