正相手性分离方法开发：以 AS-H 手性柱为例的流动相优化

正相手性分离是药物研发、天然产物分析中拆分对映体的常用手段，而流动相优化是方法开发的核心。

CHIRALPAK® AS-H 作为多糖衍生物涂敷型正相手性柱，凭借直链淀粉 - 三 [(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯] 固定相的手性环境，对含芳香环、极性基团的手性化合物具有优异选择性。以下以 AS-H 为例，介绍正相流动相的优化策略。

一、起始流动相的选择：烷烃 / 醇体系为基础

AS-H 手性柱的正相分离以烷烃（正己烷、异己烷为主）为基础溶剂，加入醇类（异丙醇、乙醇）作为改性剂，起始推荐比例为 正己烷 / 异丙醇 = 90:10（v/v）。

· 烷烃提供弱极性环境，维持固定相的手性空腔结构；

· 异丙醇作为极性改性剂，通过竞争固定相的氢键位点调节对映体保留时间，比例越高，洗脱能力越强，出峰越快。

二、改性剂的调整：优化分离度与保留时间

1. 醇类类型替换：

若异丙醇体系分离度不足，可换用乙醇（洗脱能力稍强于异丙醇），往往能缩短保留时间并改善峰形。

例如，将 “正己烷 / 异丙醇 = 80:20” 替换为 “正己烷 / 乙醇 = 80:20”，部分芳香族手性化合物的分离度可提升 10%-15%。

2. 醇比例梯度优化：

难分离对映体：降低醇比例（如 95:5），延长保留时间以增强选择性；

保留过强的化合物：提高醇比例（如 70:30），缩短分析时间，避免峰形展宽。

三、极性溶剂的辅助：甲醇与乙腈的应用

当烷烃 / 醇体系分离效果不佳时，可引入甲醇或乙腈作为辅助溶剂：

· 甲醇 / 烷烃体系：适用于含羟基、氨基的极性手性化合物，推荐甲醇比例≤15%（需加入少量乙醇助溶，避免分层）；

· 乙腈 / 醇体系：乙腈与异丙醇按 85:15 混合时，可增强对酯类、酰胺类化合物的选择性，常用于 AS-H 柱拆分复杂天然产物。

四、添加剂的使用：改善峰形与选择性

针对碱性或酸性样品，可加入微量添加剂：

· 碱性样品：添加 0.1% 二乙胺（DEA），抑制固定相残留硅羟基与样品的吸附，峰形更对称；

· 酸性样品：加入 0.1% C₂HF₃O₂（TFA），增强与固定相的氢键作用，提升分离度。

五、温度的协同调节

柱温对 AS-H 柱的选择性影响显著：

· 低温（如 0-10℃）可增强空间位阻效应，提高分离度（尤其适用于结构相似的对映体）；

· 高温（如 30-40℃）可加快传质速率，缩短保留时间，适合快速筛选。

总结：AS-H 流动相优化流程

1. 以正己烷 / 异丙醇（90:10）为起始，评估分离度与保留时间；

2. 替换醇类型（异丙醇→乙醇）或调整比例，优化基础分离；

3. 必要时引入甲醇 / 乙腈辅助，针对极性化合物增强选择性；

4. 加入适量添加剂改善峰形，结合温度调节进一步优化。

通过以上策略，可充分发挥 AS-H 手性柱的优势，高效实现正相体系下的手性拆分，为药物纯度检测、天然产物分析提供可靠方法。

广州绿百草作为 Daicel 大赛璐授权代理商，提供色谱柱选型、方法开发等技术支持，助力客户高效实现手性分离与分析。