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如何正确清理你的HPLC色谱柱

更新时间:2022-11-14点击次数:867

清洁 HPLC 色谱柱的正确方法


我们都知道高效液相色谱柱有一个有限的生命周期,即使经过良好的清理和储存,它们也将达到其生命周期的终点。但是,您可以采取某些措施来zui大限度地延长色谱柱的使用寿命。

如何正确清理你的HPLC色谱柱

我们所有的 HPLC 色谱柱都使用运输溶剂运送给您。对于反相色谱柱,这通常由某种有机物(乙腈或甲醇)和水组成。对于此类色谱柱,在安装之前,您可以用流动相冲洗溶剂管线,安装新色谱柱,用流动相调节色谱柱,然后您就可以开始分析了。

对于在反相和正相条件下运行的色谱柱,您需要注意运输溶剂并确认您的流动相溶剂与运输溶剂混溶/兼容。如果没有,您需要使用溶剂切换程序.

准备好使用 HPLC 色谱柱后,您可以  通过安装在线过滤器、捕集柱来帮助保持其完整性,和一个保护柱。这些将有助于防止污染物损坏您的 HPLC 分析柱。然而,当污染确实积累时,有几种方法可以对抗它。

清洗 HPLC 色谱柱
使用色谱柱后,始终建议在存放前清洁色谱柱。清洗程序通常涉及使用zui接近色谱柱上zui后一个溶剂系统的等度/梯度清洗,但用 HPLC 级水代替缓冲液。这将确保从色谱柱中去除缓冲液成分。然后,您可以增加洗涤中的有机物百分比,以进一步去除任何疏水性杂质。

反冲洗 HPLC 色谱柱
如果您发现峰形变差并伴随反压增加,建议对色谱柱进行反向冲洗。在反向冲洗之前,重要的是要确保您的流动相或柱内溶剂与您的清洗溶剂混溶,并且您的流速不超过色谱柱典型推荐流速的一半。详细程序,按照我们的说明色谱柱保养指南. 您可以使用以下公式确定色谱柱体积: V = pr2L 其中 V 是以 mL 为单位的色谱柱体积,r 是以 cm 为单位的色谱柱半径,L 是以 cm 为单位的色谱柱长度。

在使用后正确清洗反相 HPLC 色谱柱时,首先将您的流动相更换为 95% HPLC 级水和 5% 乙腈,然后以大约 10 倍的柱体积通过 HPLC 色谱柱以一半的流速冲洗. 这将移除任何留在 HPLC 柱中的缓冲液。然后,您可以根据需要逐步移动,将有机物含量增加到约 95% 乙腈和 5% 水,反冲洗后,将色谱柱正向连接,并在使用前与常规流动相连接。请注意,在反向冲洗色谱柱时,断开色谱柱与检测器的连接。了解如何正确反冲洗您的 HPLC 色谱柱使用这些技巧.

高效液相色谱柱存储
使用后正确存放色谱柱也很重要,尤其是要存放很长时间. 当您的 HPLC 色谱柱仍含有任何缓冲液或离子对试剂时,请务必不要将其存放起来。为确保这一点,冲洗五个柱体积s没有缓冲液的流动相通过 HPLC 色谱柱。对于具有离子对试剂的色谱柱,可能需要延长清洗时间以将它们从色谱柱中完·全去除。洗完后反着放d乙腈/水 (65:35 v/v) 相色谱柱,可使用甲醇代替乙腈,正相色谱柱为 100% 己烷或 IPA,离子交换色谱柱为 100% 甲醇,和 HILIC 色谱柱,乙腈/水 (80:20 v/v)


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