技术文章
当手性色谱柱分离度下降、
柱压过高等色谱柱异常现象发生时,
才需要使用本方法冲洗
1、一般情况下,使用常规方法冲洗色谱柱;若常规方法无效,则使用特殊方法一冲洗色谱柱;若特殊方法一无效,则使用特殊方法二冲洗色谱柱。
2、冲洗过程中,10µm柱柱压请勿超过3Mpa,5µm柱柱压请勿超过6Mpa,3µm柱柱压请勿超过15Mpa。
3、以下冲洗过程中涉及的流速仅供参考,实际操作中以柱压不超过以上说明为宜。
4、以下冲洗过程中提到的20倍柱体积,以4.6*150mm规格柱为例,约为30mL。
常规方法:
1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,冲洗20倍柱体积;
2、冲洗结束,验柱或重复以前的样品实验,看是否柱效有提高。
特殊方法一:
1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,冲洗20倍柱体积;
2、逐渐提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,冲洗20倍柱体积;
3、逐渐增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
4、冲洗结束,验柱或重复以前的样品实验,看是否柱效有提高。
特殊方法二:
1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,冲洗20倍柱体积;
2、逐渐提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,冲洗20倍柱体积;
3、再用酸性流动相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,冲洗20倍柱体积;
4、再用中性流动相甲醇过渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,冲洗20倍柱体积;
5、逐渐增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
6、冲洗结束,验柱或重复之前的样品实验,看是否有提高柱效。