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多糖涂敷型手性柱(反相流动相)冲洗方法

更新时间:2022-11-11点击次数:1050

当手性色谱柱分离度下降、

柱压过高等色谱柱异常现象发生时,

才需要使用本方法冲洗

以下冲洗步骤及流动相体系仅适用于大赛璐多糖涂敷型反相手性柱AD-RH/AD-3R,AS-RH/AS-3R,AY-RH/AY-3R,AZ-RH/AZ-3R,OD-R/OD-RH/OD-3R,OJ-RH/OJ-3R,OX-RH/OX-3R,OZ-RH/OZ-3R,流速仅适用于3/5/10µm, 4.6*150/250mm规格,对于其他规格的手性柱,其冲洗时所用的流速请根据各自所能耐受柱压不同另行调整。


1、一般情况下,使用常规方法冲洗色谱柱;若常规方法无效,则使用特殊方法一冲洗色谱柱;若特殊方法一无效,则使用特殊方法二冲洗色谱柱。

2、冲洗过程中,10µm柱柱压请勿超过3Mpa,5µm柱柱压请勿超过6Mpa,3µm柱柱压请勿超过15Mpa。

3、以下冲洗过程中涉及的流速仅供参考,实际操作中以柱压不超过以上说明为宜。

4、以下冲洗过程中提到的20倍柱体积,以4.6*150mm规格柱为例,约为30mL。



冲洗方法

常规方法:

1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,冲洗20倍柱体积;

2、冲洗结束,验柱或重复以前的样品实验,看是否柱效有提高。

特殊方法一:

1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,冲洗20倍柱体积;

2、逐渐提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,冲洗20倍柱体积;

3、逐渐增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

4、冲洗结束,验柱或重复以前的样品实验,看是否柱效有提高。

特殊方法二:

1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,冲洗20倍柱体积;

2、逐渐提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,冲洗20倍柱体积;

3、再用酸性流动相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,冲洗20倍柱体积;

4、再用中性流动相甲醇过渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,冲洗20倍柱体积;

5、逐渐增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

6、冲洗结束,验柱或重复之前的样品实验,看是否有提高柱效。





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