大赛璐 DAICEL CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 色谱柱使用手册

CROWNPAK® CR(+) / CR(-)  色谱柱使用手册

请在使用前仔细阅读本《使用手册》

  色谱柱描述  

所有色谱柱在出厂前都经过检测。检测条件、结果及批号请查阅《出厂检测报告》。

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注意

使用CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 需特别注意溶剂使用限制。

如果在该色谱柱使用了不恰当的分析条件，会导致固定相性能的急剧下降或使色谱柱失去保留能力。必须要避免纯有机溶剂的状态。

在色谱柱连接到液相仪器前，整个液相体系（包括进样器及定量环）必须先用乙醇冲洗，然后再用100%蒸馏水冲洗。

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  手性识别机理  

CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 的手性识别机理：在酸性条件下，样品质子化成铵离子（- NH3+），与冠醚形成可逆复合物。

冠醚柱用于分离氨基酸及手性中心上有伯胺基团的化合物。

在CROWNPAK® CR(+)上，D-构型氨基酸先出峰。

在CROWNPAK® CR(-)上，D-构型氨基酸后出峰。

  操作条件  

说明：在HPLC 的压力范围内操作，色谱柱填料稳定。

           给定柱温下，柱后压与流速是线性关系。

① 推荐值可延长色谱柱使用寿命，但色谱柱耐受至150Bar 的压力。

② 柱后压是指由色谱柱本身引起的压力。其值为总压（液相体系+色谱柱）与液相体系（不接色谱柱时）压力之差。

③ 通常，温度越低，分离度越大。尤其对亲水性样品。对一些疏水性样品，在较低温度下样品会在色谱柱上强保留。

  操作过程  

！如果您想使用下述没有提及的流动相成分，请与我们联系确认。

A – 流动相

本色谱柱需在以下的酸性条件下使用。

① · 通常流动相的pH范围：pH 1 ~ pH 2 (在pH 9以内色谱柱是稳定的)。

 · pH越低，分离度越好；但是色谱柱使用寿命也越短。选择刚好能满足分离的pH值能延长色谱柱使用寿命。

 · 降低温度也能增加手性选择性。

 · 还可以使用其他的酸，比如硝酸和三氟乙酸。但一般推荐用高氯酸，在多数情况下，分离度更好，紫外吸收也很低。

② · 为缩短疏水性化合物的保留时间，可以在流动相中加些甲醇（15%）。

        甲醇的比例超过15%或者使用其他有机相，极易损伤色谱柱填料。

B – 流动相配制举例

a) pH = 1.0

      称取市售浓度为70%的高氯酸16.3g，用去离子水稀释并定容至1L。

b) pH = 2.0

      量取100 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去离子水稀释并定容至1L。

c) pH = 1.5

      量取316 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去离子水稀释并定容至1L。

d) pH = 1.3

      量取500 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去离子水稀释并定容至1L。

说明：   - 流动相需完全脱气或用氦气彻底纯化。

             - 疏水性化合物在柱上的容量因子取决于样品本身，比亲水性化合物出峰时间晚很多。但样品在色谱柱上出峰早且分离度小，可以通过降低流动相的pH值（及柱温）来优化。

             - 尽管钾盐不会损伤色谱柱，但它会使柱子彻底失去手性选择能力。我们使用流动相及样品时必须确保无钾盐。

  色谱柱保养/维护  

 为延长柱子使用寿命，强烈建议使用保护柱。

 样品必须用纯水溶解，并经接近0.5μm 孔径的滤膜过滤。在配制样品溶液时，如果甲醇的比例超过15%，也会对色谱柱造成不可逆的损伤。

 样品浓度太高，进样后会引起柱效降低。样品浓度只需有10-8 ~ 10-7 mol，即能看到紫外响应。

 实验结束后，请用蒸馏水冲洗色谱柱。长期保存(1 周以上)，用色谱柱保存溶剂水/甲醇(95/5 v/v)保存。

 如果出现裂峰 (长期使用后)，将色谱柱反接，用纯水冲洗。但一般不建议反接冲洗。

  注意事项  

 强碱性的添加剂或样品溶液不能进色谱柱，以免破坏色谱柱硅胶。

 本《使用手册》不适用于其他的大赛璐手性柱。

   严格按照《使用手册》使用色谱柱，可延长色谱柱使用寿命。

 如您在手性柱使用中有任何疑问，请联系大赛璐授权代理商-广州绿百草。

  换算表  

 色谱柱内径/流速

 压力

CROWNPAK® CR(+)分离氨基酸实例

严格按照《使用手册》使用色谱柱，可延长色谱柱使用寿命。

本《使用手册》不适用于其他的大赛璐手性柱

若您在手性柱使用中有任何疑问，

请联系 DAICEL/大赛璐代理商-广州绿百草。