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如何清洁或再生色谱柱?

更新时间:2023-04-27点击次数:480

背压增加、保留时间变化和柱性能损失都是色谱柱入口筛板、色谱柱或固定相表面沉积物的常见症状。大多数情况下,这些问题可以通过使用正确的洗涤程序来克服。  越早使用色谱柱再生程序,您就越有可能恢复色谱柱的原始性能。  


在色谱柱的溶剂入口端收集强吸附物质,在许多情况下,洗涤过程中使用反向流动是有益的。与人们普遍认为的相反,逆流永远不会损害填料良好的色谱柱。提到的流动方向通常是色谱柱最初填充的方向。请注意,不规则/无定形原始二氧化硅在逆流时可能会出现问题,因为可能会重新构造填充床。 当在这些不规则二氧化硅上反转流动时,应始终格外小心。


请检查我们针对不同固定相( 建议的再生程序,RP、NP、离子交换等 ) 并在这些程序后执行 CoA 色谱柱测试,如果原始压力恢复,以评估色谱柱性能/峰对称性。  


清洗和再生程序

如果足够小心,就可以在很长一段时间内保持柱效和可靠性。本节旨在提供有关有助于延长 HPLC 色谱柱寿命的不同程序的信息。  


清洁与再生的区别

我们通常假设,分离后,柱或筒中*初存在的所有物质都已洗脱。运行后,在开始新的分离之前,用2-3柱体积的初始溶剂混合物清洗色谱柱。但是,如果流动相成分的强度不足以在常规运行期间将其洗脱,则一些强烈保留在色谱柱上的杂质将在进样口处积聚。 发生这种情况时可能会出现一些不可忽视的问题:性能损失、背压增加、峰拖尾、保留时间偏移或基线漂移。 为避免这种情况,强烈建议在出现任何这些症状之前定期清洁色谱柱。这个过程很简单,不需要修改通常的色谱设置。 当清洁不充分时,可能需要进行更彻·底的处理,即再生,以避免丢弃色谱柱。  


建议的清洁和再生程序

使用的清洁程序越多,所需的条件就越不严格。 应在色谱柱储存之前或色谱柱似乎堵塞时执行再生程序。 流速通常设置为低于分离期间的流速( 通常为 20% 至 50% )。  


色谱柱体积( 包括填料体积 ),单位为 mL = π x [色谱柱半径,单位为厘米] 2 x [色谱柱长度,单位为厘米]  


柱子  建议的清洁程序  建议的再生程序  
Silia Chrom 高效液相色谱柱  - 设置流量( 通常的 20% 到 50% )   - 用 2-3 倍柱体积的以下每种溶剂冲洗  - 反吹色谱柱   - 设置流量( 通常的 20% 到 50% )   - 用 10 倍柱体积的以下每种溶剂冲洗  
反相柱  ( C18、C8、C4、C1、胺、氰基、苯基、PFP等 )  - 水/乙腈 (95/5) 以去除缓冲液   - 水/乙腈 (5/95)   - 分离过程中使用的流动相  - 水/乙腈 (95/5)   - 四氢呋喃   - 水/乙腈 (5/95)   - 分离过程中使用的流动相  
正相柱  ( 胺、氰基、二醇等 )  注意:切勿用水。  - MeOH/CHCl 3 (50/50)   - 乙酸乙酯   - 分离过程中使用的流动相  - MeOH/CHCl 3 (50/50)   - 异丙醇和乙酸乙酯   - 分离过程中使用的流动相  
非键合硅胶柱  ( 二氧化硅 )  - 己烷、异丙醇和二氯甲烷   - 分离过程中使用的流动相  - 己烷、异丙醇和二氯甲烷   - 分离过程中使用的流动相  
离子交换柱  ( SCX、SAX 等 )  - 5 mM 磷酸盐缓冲液 pH 7.00   - 醋酸/水 (10/90)   - 水、甲醇和水  - 5 mM 磷酸盐缓冲液 pH 7.00   - 醋酸/水 (10/90)   - 水、甲醇和水  



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