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如何正确清洗 HPLC 色谱柱

更新时间:2023-02-08点击次数:767

高效液相色谱柱

液相色谱柱分为三种基本类型:液-液、液-固和离子交换。液-液柱不太受欢迎,因为它们的稳定性有限且使用不便。在液固柱中,固定相是固体,分析物被吸收到固定相中,从而分析混合物的组成。通常,HPLC 之前装有保护柱,以保护和延长分析柱的使用寿命。保护柱的作用是去除柱中不可逆的颗粒、污染物、分子等。您还可以选择C18 碱性 HPLC 色谱柱、苯醚 HPLC 色谱柱、C8/C18 标准 HPLC 色谱柱和其他 HPLC 色谱柱使用。

常用的 HPLC 色谱柱由不锈钢制成,但也可以由厚玻璃、聚合物(如聚醚酮)、不锈钢和玻璃的组合或不锈钢和聚合物的组合制成。使用不锈钢有很多优点,例如不锈钢比玻璃更耐腐蚀、耐高压、耐磨损,这也降低了使用成本。典型的 HPLC 色谱柱长 3 到 25 厘米,直径为 1 到 5 毫米,这与通常是直的 GC 色谱柱不同。填充色谱柱的颗粒的典型直径在 3 到 5 µm 之间。当柱内积聚的颗粒直径减小时,液相色谱柱的效率将提高。

峰或峰变宽会导致柱效降低。理想情况是尖峰得到解决。物质在色谱柱中停留的时间越长,峰就会越宽。

清洁 HPLC 色谱柱

我们都知道 HPLC 色谱柱的生命周期是有限的,即使经过良好的清洁和储存,它们也会到达生命周期的尽头。但是,您可以采取某些措施来*大限度地延长色谱柱的使用寿命。准备好使用 HPLC 色谱柱后,您可以通过安装在线过滤器、捕集柱和保护柱来帮助保持其完整性。这些将有助于防止污染物损坏您的 HPLC 色谱柱。

使用色谱柱后,始终建议在存储前清洁色谱柱。清洁程序通常涉及使用*接近*后一个溶胶的溶剂系统进行等度/梯度清洗

在色谱柱上排气,但使用 HPLC 级水代替缓冲液。这将确保从列中删除缓冲区组件。然后,您可以增加洗涤液中有机物的百分比,以进一步去除任何疏水性杂质。

反洗 HPLC 柱

如果您注意到峰形变差并伴有反压增加,建议对色谱柱进行反吹。在反吹之前,务必确保您的流动相或柱内溶剂可与您的清洁溶剂混溶,并且您的流速不超过色谱柱典型推荐流速的一半。有关详细程序,请遵循我们的说明性色谱柱维护指南。您可以使用以下公式确定色谱柱体积:V = pr2L 其中 V 是以 ml 为单位的色谱柱体积,r 是以 cm 为单位的色谱柱半径,L 是以 cm 为单位的色谱柱长度。

要在使用后正确清洁反相 HPLC 色谱柱,首先,将流动相替换为 95% HPLC 级水和 5% 乙腈,然后以大约 10 倍色谱柱体积的一半流速冲洗 HPLC 色谱柱。这将去除 HPLC 柱中剩余的任何缓冲液。然后,您可以根据需要逐渐移动,将有机物含量增加到大约 95% 的乙腈和 5% 的水,反洗后,在使用前将色谱柱向前连接到常规流动相。请注意,反洗色谱柱时,请断开色谱柱与检测器的连接。了解如何使用这些提示正确反洗 HPLC 色谱柱。

HPLC 柱存储

使用后妥善存放色谱柱也很重要,尤其是长时间存放时。重要的是不要在 HPLC 色谱柱仍含有任何缓冲液或离子对试剂时存放它。为确保这一点,通过 HPLC 柱冲洗五个柱体积,而无需流动相缓冲液。对于带有离子对试剂的色谱柱,可能需要延长清洗时间以将它们从色谱柱中去除。洗涤后,将色谱柱倒置在乙腈/水 (65:35 v/v) 中,使用甲醇代替乙腈,正相柱使用 100% 己烷或 IPA,离子交换柱使用 100% 甲醇,乙腈/水(80 :20 v/v) 对于 HILIC 色谱柱。


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