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HPLC流动相制备提示与技巧

更新时间:2022-11-30点击次数:786

HPLC中使用的流动相直接影响样品中组分的保留和差异迁移,从而对样品的分离产生深远的影响。因此,正确且尽可能一致地进行流动相制备至关重要。以下是流动相制备的一些提示和技巧,可确保分离和分析的*高准确度。


使用简单的流动相

使用简单的流动相将获得更稳定、更易于转移的方法。这些方法使组织受益,因为当实施可靠的方法时,故障排除和停机时间将降至最·低


使用适当等级的溶剂和试剂

构成流动相的组分必须具有最高纯度,这一点至关重要。对于溶剂,应根据应用使用正确的牌号。当涉及到试剂时,它们必须具有高纯度并且不超过有效期。


基于重量的流动相制备基础

虽然流动相制备可以基于体积比,但体积会随着温度的变化而变化,这会影响分离的准确性和重现性。因此,流动相制备最好基于重量比,即使环境条件发生变化,重量比也能保持一致。


分别混合流动相组分

如果根据体积进行流动相制备,则重要的是分别测量流动相的组分,然后将它们合并。如果先测量水,并将有机溶剂加入到水中,溶剂混合物的收缩会增加其浓度。如果将水添加到溶剂混合物中,溶剂混合物的收缩将降低其浓度。


使用预混流动相

混合流动相的替代方法是使用预混流动相。这在反相色谱中特别有用,因为它有助于避免混合过程中的温度变化,提高混合效率,并使混合物更有效地脱气。


校正溶剂的温度

当依赖体积时,溶剂必须达到室温,以确保体积一致和分析的重现性。这应该通过将溶剂放入热水或冷水浴中来完成,以适当调节溶剂温度所需的为准。


选择正确的过滤器

在制备过程中过滤流动相时,选择正确的滤光片类型非常重要。对于HPLC系统,建议使用孔径为0.45μm或更小的膜式过滤器。对于UPLC系统,孔径应为0.22 μm或更小。这样可以有效地去除流动相中的颗粒,防止系统堵塞。


最终,您希望流动相制备不仅正确,而且一致。这将确保分析的重现性,并保护您运行的分离的完整性。

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