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C18色谱柱的活化及维护方法

更新时间:2023-04-23点击次数:5186

在液相色谱实验中,C18色谱柱是常见的一种反相色谱柱。以下是对该柱子进行活化和维护的方法:


C18色谱柱的活化及维护方法


1. 活化新柱

  1. 防脱壳处理:将新柱浸入纯甲醇或乙腈溶液中,旋转或以其它方式使其表面完·全接触至少30分钟。洗去大部分残留有机物之后,用纯水或75%甲醇或乙腈冲洗2-3次直到输出液为无色无味水平。

  2. 酸碱洗处理:在防脱壳处理完成后,使用0.1-1%的醋酸溶液滴于色谱柱表面并停留约30分钟,并彻·底用DI水冲洗干净。然后采用0.1-1%的氨水溶液吸附含氨基的样品于柱子上并停留约30分钟,Z后再次用DI水推出至输出稳定后即可。

  3. 有机物处理:加入摩尔比1:1的异丙醇和甲酸制成的混合液进柱子中,在流速为0.5 mL/min的条件下梯度洗脱(10% B, 3min; 40% B, 3min; 95% B, 3min,重置至10%过渡三分钟),使其开放性自由胶体的更快恢复。

注意,活化步骤而区地直到输出液为无色无味水平,这一点比较关键。如果您在某些步骤中出现了问题,例如未完·全去除残留有机物、洗涤溶剂未严格控制等,可能会影响到Z终结果。因此,对于分析灵敏性和分辨率较高的分析,请尽可能保持每个步骤的准确性和一致性。

2. 柱子的维护

  1. 保持洁净:用高纯度水、其他常见的有机溶剂进行冲洗,去除表面残留样品、盐和溶液等物质。

  2. 防止干燥:建议如果长期不使用反相色谱柱,注满一定比例的溶剂并密封。

  3. 正确使用:使用时应避免太高或太低的流量,以及过强的压力。不使用时封住两端,避免杂质进入。

记得,C18色谱柱的使用寿命大约为100~200次,当输出结果的峰形变得模糊、输出稳定性下降时,请及时更换新柱。

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