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什么是保护柱?它们在 HPLC 分析中有什么好处?

更新时间:2022-10-28点击次数:1251

高效液相色谱系统的有效运行取决于流动相和样品不受化学杂质或固体悬浮液的影响。HPLC流动相处理和使用中的注意事项讨论了流动相制备和使用过程中应采取的措施。样品过滤的重要性讨论了清洁样品进样的好处。


高效液相色谱柱是高效液相色谱系统的关键部件,需要小心处理和保护。经常更换色谱柱是很昂贵的,因此您的目标应该是*大限度地延长色谱柱的使用寿命,以便每次都能获得所需的准确度和一致性结果。


由于杂质和悬浮液的逐渐累积,HPLC柱的色谱行为在使用过程中开始下降。流动相或样品中大于2μm的颗粒开始沉积在柱的入口玻璃料上,从而干扰流动的均匀性。较小的颗粒会导致背压增加,因此它们开始阻塞固定相的流动路径。


污染物的性质


·反相分离中高度保留的化合物,如脂肪酸
·不可逆保留的化合物,如残留的蛋白质,在样品提取时未完·全去除。强烈建议在HPLC分析之前对生物液体中的蛋白质进行脱蛋白处理。
·颗粒杂质可能是由于样品未过滤,系统部件(如泵或喷油器中的密封件)磨损而释放的颗粒。

·柱内残留缓冲液干燥产生的结晶沉积物。使用后用HPLC级水或缓冲溶液清洗色谱柱可防止此类盐沉积的形成。


什么是保护柱?


保护柱是安装在进样器和分析柱之间的保护柱或小柱。 它用于去除到达分析柱的杂质和悬浮固体。 通常它具有大约 2 厘米的长度和 4.6 毫米的内径。 保护柱填充有约 40 μm 大小的片状颗粒,压降可忽略不计。

保护柱


护柱的理想特性


·保护柱最好具有与分析柱相同的填料,以消除分离并发症
·护柱的内部ID应与分析柱相当,以将背压降至最·低。较短的保护柱长度是可取的,但其长度应足以防止强烈保留的化合物到达主柱
·面向注入器的熔块应可移除,以便通过移除约2 mm的材料并填充新材料进行清洁
·与可重新填充的防护柱相比,一次性盒式防护柱使用方便且经济。

需要定期更换保护柱,但通过观察色谱行为的变化,如背压增加、峰加宽和峰保留时间的变化,需要进行中间更换。然而,变化频率可根据样品的化学成分、高保留或不可逆保留成分的存在、进样量或进样次数来确定。


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